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Resumen En el desarrollo de esta práctica se realizaron diferentes ensayos cualitativos(ninhidrina, ácido nitroso, xantoproteica, de Millón, Folin – Ciocalteau, Hopkins – Colé, Koop , Sakaguchi, nitroprusiato, con el objetivo de Comprobar la
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    COMPROBANTE   DE   AMINOÁCIDOS INGENIERÍA DE   PROCESOS UNIVERSIDAD   MARIANA 03/09/2017 Belalcazar Miguel, Martinez Dania, Tena Duvan, Torres Jimmy  daniamartinez@umariana.edu.co   ,  jitorres@umariana.edu.co mibelalcazar@umariana.edu.co,Santitenaa@gmail.com  Resumen Eneldesarrollodeestaprácticaserealizarondiferentesensayoscualitativos(ninhidrina, ácidonitroso,xantoproteica,deMillón,Folin–Ciocalteau,Hopkins–Colé,Koop, Sakaguchi,nitroprusiato,conelobjetivodeComprobarlapresenciadeaminoácidosen formalibreohaciendopartedelasproteínas,conbaseenlasreaccionescaracterísticasde los grupos funcionales presentes. palabrasclaves: aminoácidos,cisteína,testmillon,hipobromitodesodio,reacciónde hopkins Abstract Inthedevelopmentofthispractice,differentqualitativetests(ninhydrin,nitrousacid, xantoproteica,Millón,Folin-Ciocalteau,Hopkins-Colé,Koop,Sakaguchi,nitroprussiate) werecarriedouttoverifythepresenceofaminoacidsinfreeformorpartoftheproteins, based on the reactions characteristic of the functional groups present. Keywords: Hopkins reaction, amino acids, cysteine, millionth test, sodium hypobromite.    Introducción Setomarácomoimportanteenesteinformelabúsquedaderesultadospositivosendonde seapresentelapresenciadeaminoácidosparaestoseusaráreactivosloscualesse reflejaran en la rama apartada de lo que es el grupo carboxilo y el amino (Fig 1) Fig 1 Segúnlosaminoácidostrabajadosseemplearándiferenteformasoprocedimientosquede talmaneramuestrenunareacciónconlosreactivospasandodespuéspordiferentespasos comobañosatemperaturaparaasídenotarcolores,densidades,uotrosaspectos característicos de una prueba positiva o negativa. Pararealizarunabuenaexperimentaciónquedéunresultadoconcretosedebeidentificarel aminoácidoconelquesedeterminaraeltipodereacciónfrenteasureactivo correspondiente.    Materiales Y Métodos Materiales: ●3 beakers de 250 mL ●1 gradilla ●30 tubos de ensayo ●1 termómetro ●1 pinza para tubos de ensayo ●1 pinza para beaker. ●Equipo (plancha de calefacción)  Reactivos: ●ninhidrina en acetona (0,1 %m/V) ●ácido clorhídrico   concentrado ●ácido sulfúrico concentrado ●ácido nítrico concentrado ●ácido acético concentrado ●nitrito de sodio (5 % m/V) ●hidróxido de ●sodio (40 % m/V y 20 % m/V) ●bromo en ácido acético (2.8 % m/V) ●alfa naftol   (0.05% m/V en etanol) ●hipobromito de sodio (1 N) ●   carbonato de amonio (10 % m/V) ●urea (40 % m/V) ●nitroprusiato de sodio (5 % m/V) ●reactivo de Millon ●reactivo de Folin-Ciocalteau alcalino ●reactivodeFolin-Ciocalteaudiluido (1:2 en agua), ●solucionesdeaminoácidosy proteínas(0,1%m/V)(histidina, metionina,fenilalanina,triptófano, arginina,cisteína,glicina,lisina tirosina,ácidoaspártico,caseína, gelatina) ●hielo.    Métodos Reacción de la ninhidrina Ensayo 1 1.Tome4tubosdeensayo ymárquelos.Deposita1mL de ninhidrina en acetona (0.1 % m/V) en cada tubo. 2.Enelprimertubo adicione 1 mL de glicina,enelsegundotubo 1mLdemetioninayenel tercertubo1mLdelisinay enelcuartotubo1mLde caseína. Agite. 3.Luegocalientetodoslos tubos en baño Maríaa90°Cdurante10 minutos.Laaparicióndeun color púrpura indica que el resultado es positivo. Reacción del ácido nitroso  Reacción del ácido nitroso Ensayo 2 1.Tome4tubosdeensayo y márquelos. 2.Enelprimertubo adicione1mLdecaseína, en el segundo tubo 1 mL de gelatina,eneltercertubo1 mLdelisinayenelcuarto tubo 1 mL de arginina. 3.Luegoañada0,5mLde ácidoclorhídrico concentradoy1mLde nitritodesodio(5%m/V)a cadatubo.AgitarLa aparicióndepequeñas burbujasindicaquela reacción es positiva. Reacción xantoproteica Ensayo 3 1.Tome5tubosdeensayo y márquelos. 2.Enelprimertubo adicione1mLdetirosina, enelsegundotubo1mLde triptófano,eneltercertubo 1mLdefenilalanina,enel cuartotubo1mLdecisteína y en el quinto tubo 1 mL de caseína. 3.Posteriormenteadicione 1mLdeácidonítrico concentrado. Agite. 4.Calientelostubosde ensayoenbañoMaríaa90 °Cdurante10minutos.La solucióndebetornarsecolor  amarilla. 5.Luegointroduzcalos tubosdeensayoenunbaño de hielo y añada 5 gotas de hidróxidodesodio(40% m/V).Elvirajeacolor  naranja,indicaquela reacción es positiva. Reacción de Millón Ensayo 4 1.Tome3tubosdeensayo y márquelos. 2.Enelprimertubo adicione1mLdetirosina, en el segundo 1 mL de 10 fenilalaninayeneltercer  tubo 1 mL de gelatina. 3.Inmediatamenteagregue 5gotasdelreactivode Millonacadatubo.4. Calientelostubosde ensayoenunbañoMaríaa 90 °C durante 10 minutos. 5.Dejeenfriara temperatura ambiente y agregue5gotasdenitrito desodio(5%m/V)acada tubo.Laaparicióndeun colorrojoladrilloindicaun resultado positivo.    Reacción de Folin – Ciocalteau Ensayo 5 1.Tome3tubosdeensayo y márquelos. 2.Enelprimertubo adicione1mLdetirosina, enelsegundo1mLde fenilalaninayeneltercer  tubo 1 mL de gelatina. 3.Posteriormenteadicione 2mLdelreactivoalcalino de Folin – Ciocalteau. 4.Agitarlostubosydejara temperaturaambiente durante 10 minutos. 5.Luegoañadir1mLdel reactivo de Folin  – Ciocalteau diluido (1:2). 6.Acontinuacióncaliente lostubosdeensayoen bañoMaríadurante20 minutosa40°C.Sila coloracióndelasoluciónes azul, indica que la reacción es positiva. Reacción de Hopkins – Colé Ensayo 6 1.Tome3tubosdeensayo y márquelos. 2.Enelprimertubo adicione1mLdetriptófano, enelsegundo1mLde glicinayeneltercertubo1 mL de caseína. 3.Posteriormenteañada2 mLdeácidoacéticoacada tubo. 4.Luegoadicione1mLde ácidosulfúricoconcentrado gotaagotaporlasparedes deltubo,demodoquese formendoscapas.Agite.La aparición deuncolorvioletaindica que la reacción es positiva.  Reacción de Koop Ensayo 7 1.Tome3tubosdeensayo y márquelos. 2.Enelprimertubo adicione1mLdehistidina, en el segundo 1 mL de argininayeneltercertubo 1 mL de caseína. 3.Inmediatamenteañada 0,5mLdebromo(2,8% m/V) a cada tubo. 4.Despuésde10minutos adicione1mLdecarbonato de amonio (10 % m/V). Agite.Observesilasolución se colorea de azul – violeta. 5.Silasoluciónnose colorea,calienteabaño Maríaa90°Cdurante10 minutos.Laaparicióndeun colorazul–violetaindica que la reacción es positiva. Reacción de Sakaguchi Ensayo 8 1.Tome3tubosdeensayo y márquelos. 2.Enelprimertubo adicione1mLdearginina, en el segundo tubo 1 mL de ácidoaspárticoyenel tercertubo1mLde caseína. 3.Luegoañada0.5mLde hidróxidodesodio(20% m/V) y 0.5 mL de alfa naftol (0.05 % m/V). 4.Agitefuertementee introduzcatodoslostubos en un baño de hielo durante 10 minutos. 5.Luegoañada3gotasde hipobromitodesodio(1N). Silasoluciónsetornade colorrojoindicaquela reacciónespositiva,esta coloraciónse desvanececonrapidez.La adiciónde10gotasdeurea (40%m/V)estabilizael color. Reacción con nitroprusiato Ensayo 9 1.Tome3tubosdeensayo y márquelos. 2.Enelprimertubo adicione1mLdetriptófano, enelsegundo1mLde metioninayeneltercertubo 1 mL de cisteína. 3.Posteriormenteañadaen orden1mLdehidróxidode sodio(20%m/V),0.5mL dehistidinay0.5mLde nitroprusiatodesodio(5% m/V) a cada tubo. 4.CalienteenbañoMaríaa 90°Cdurante10minutos. Laaparicióndeuncolorrojo intenso indica que la prueba positiva.
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