Documents

beneficiile gumei xantan.docx

Description
I. INTRODUCERE Guma xantan este un aditiv alimentar ce a fost descoperit de Allene Rosalind Jeanes, cercetător în cadrul USDA. A fost aprobată pentru consum uman în 1968 cu indicativul E415. Guma de xantan este o polizaharidă extracelulară complexă produsă de bacteria planto- patogena Xanthomonas campestris. Aceasta este produsă prin fermentarea glucozei, sucrozei sau lactozei de bacteria menţionată mai sus, apoi precipitată cu ajutorul alcoolului etilic sau izopropilic
Categories
Published
of 16
All materials on our website are shared by users. If you have any questions about copyright issues, please report us to resolve them. We are always happy to assist you.
Related Documents
Share
Transcript
  1 I.   INTRODUCERE Guma xantan este un aditiv alimentar ce a fost descoperit de   Allene Rosalind Jeanes, cercetător în cadrul USDA. A fost aprobată pentru consum uman în 1968 cu indicativul E415.   Guma de xantan este o polizaharidă extracelulară complexă produsă de bacteria planto - patogena Xanthomonas campestris. Aceasta este produsă prin fermentarea glucozei, sucrozei sau lactozei de bacteria menţionată mai sus, apoi precipitată cu ajutorul alcoolu lui etilic sau izopropilic, uscată şi mărunţită până ajunge să fie o pudră foarte fină.   E415 este folosit în industria alimentară ca stabilizator şi agent de îngroşare, cat si in industria nealimentara Cea mai importantă proprietate a gumei xantan este creşterea rapidă a vâscozităţii unui lichid chiar şi la concentraţii de 0.5%.   O altă proprietate interesantă şi foarte utilă este capacitatea soluţiilor ce conţin E415 de a deveni mai lichide în momentul în care sunt agitate pentru ca apoi acestea să îşi reca  pete vâscozitatea iniţială.   II.   EXPERIMENTUL I  –   ACTIUNEA DIRECTA A GUMEI XANTHAN ASUPRA ORGANISMULUI II.1. Introducere Modificatorii de răspuns biologic (BRM) au fost utilizați pentru tratamentul cancerului, care acționează indirect prin creșterea răspunsuri lor imune la celulele tumorale sau direct prin afectarea diferențierii și / sau a cresterii celulelor tumorale. Agenții utilizați în terapia BRM se găsesc în mod natural în organism sau pot fi produși în laborator. Acestea includ citokine, factori de creștere și anticorpi monoclonali. Compozițiile active din punct de vedere biologic derivate din  bacteri, fungi, sau plante au fost folosite ca BRM. Progresele recente au arătat că stimularea receptorilor de tip Toll (TRL) de către astfel de compuși evidențiază   în parte activitățile lor  biologice. TRL recunoaște structurile microbiene sau virale conservate distincte numite modele moleculare asociate patogenului (PAMPs). Calea de semnalizare intracelulară pentru cea mai mare  parte a TRL depinde de molecula adaptoare MyD88, care conduce la producerea de citokine inflamatorii incluzând TNF- α   și IL - 12, în timp ce activarea mediată de TLR3 necesită TRIF, care este utilizat în s emnalizarea și conducerea TLR4 l a producerea de interferoni de tip 1. A fost raportat efectu l antitumoral al LPS și al componentei sale active, lipidul A. În plus, un agonist TLR7, Imiquimod  –   medicament care modifica raspunsul imun, a fost utilizat pentru tratamentul carcinomului bazocelular superficial, în timp ce un agonist TLR9, CpG-ODN, este evaluat în studiile clinice la pacienții cu melanom și limfonă. Administrarea orală a extractelor botanice și de drojdie care conțin β -d- glucan (1,3) (1,6), cum ar fi lentinan, schizofillan și krestin, a fost, de  2 asemenea, utilizată ca BRM și a arătat efecte antitumorale prin TLR2 și TLR6. Am raportat anterior că o polizaharidă extracelulară produsă de polizaharogene Acetobactor, care este compusă din (1,4) β -d- glucan cu ramificații de resturi glicozilice, a exercitat activități antitumorale ca agonist TLR4. AC- 1 a indus producția de IL - 12 p40 și TNF- α    prin macrofage in vitro și a augmentat activitatea NK și activitățile citotoxice specifice tumorilor celulelo r T CD8 in vivo. Deoarece XG este concomitent cu (1,4) β -d- glucan și AC -1, am examinat în acest studiu dacă XG ar putea avea și efecte antitumorale  (Figura 1A) . De asemenea, sa arătat că XG a fost un inductor puternic al p49 de IL- 12 și o producție de TNF- α  prin macrofage in vitro. XG a activat calea receptorului de tip Toll, în mod semnificativ, care necesită MyD88 și a fost în principal recunoscută de TLR4. Administrarea orală a XG a exercitat efecte antitumorale cu activitate CD8 activată și NK îmbunătățită in vivo. Aceste rezultate sugerează că administrarea orală a XG poate fi benefică ca profilactică pentru neoplasme.   II.2. Materiale si metode A.   Animale Șoareci C3H / HeN, șoareci C3H / HeI și șoareci C57BL / 6 au fost închiși din Charles River (Japonia). Șoarecii cu deficit TLR2 și șoarecii cu deficit MyD88 au fost furnizați cu amabilitate de S. Akira (Japonia). Șoarecii au fost menținuți în condiții de patogeni specifici și au oferit hrană și apă ad libitum. S - au folosit șoareci cu potrivire sexuală pentru experimentele cu vârsta cuprinsă între 6 și 8 săptămâni.   B.   Prepararea gumei xantan Preparatele producătoare de polizaharidă X, campestris, au fost cultivate într  -un balon de agitare la 30 ° C timp de 5 zile și celulele au fost îndepărtate prin c entrifugare (10 000 xg) de  bulion diluat și filtrare cu celită. Polizaharidele fără celule au fost precipitate prin adăugarea de alcool izopropilic (99,9%) și precipitatul a fost dizolvat în apă. Apoi s - a adăugat soluție apoasă 5% de bromură de cetiltrimetilamoniu (CTAB) până când nu s -a mai format nici un precipitat. Complexul insolubil de polizaharidă acidă - CTAB a fost colectat prin centrifugare și re -dizolvat în  3 soluție de clorură de sodiu 20%. După dializă împotriva apei curente, polizaharida a fost precipitată cu etanol și a fost dizolvată în apă. Polizaharida acidă astfel obținută a fost dializată împotriva apei distilate și a fost liofilizată.   C.   Pregatirea celulelor Două linii celulare de macrofage de șoarece, J744.1 și RAW264.7, au fost obținute de la Institutul de Cercetări Fizice și Chimice Cell Bank (Japonia) și au fost menținute în mediu esențial al lui Dulbecco cu 10% ser fetal de bovină (FBS). Liniile de celule au fost crescute în balonul de cultură tisulară la 37 ° C în 5% C02 și au fost trecute la fiecare 2 sau 3 zile pentru a menține creșterea logaritmică. Celulele aderente peritoneale au fost preparate așa cum s -a descris. Pe scurt, celulele de exudat peritoneal au fost suspendate în RPMI 1640 conținând ser 10% fetal bovin și au fost cultivate în plăci de plastic timp de 2 h la 37 ° C. După ce celulele neaderente au fost îndepărtate, pe plăci s - a adăugat mediu complet proaspăt.   D.   Măsurarea citokinelor   Celulele J744.1 sau RAW264.7 au fost stimulate cu XG timp de 24 ore, iar nivelurile de IL-12 p40 ș i TNF- α  în supernatantele culturii au fost determinate prin utilizarea kiturilor ELISA disponibile în comerț de la R & D (Cambridge, MA). Celulele aderente peritoneale au fost incubate timp de 24 ore cu XG, LPS, lipoproteină sintetică, lipidă sintetică A sau PBS în prezența IFN - gama (30 U / ml). Supernatantul de cultură a fost colectat și IL - 12 p40 și TFN -alfa în supernatantele de cultură au fost măsurate prin ELISA.   E.   Inocularea celulelor tumorale și administrarea orală a XG   Celulele de melanom B16Kb au fost preparate așa cum s -a descris anterior. MBT-2 derivate dintr- o tumoare de vezică indusă de carcinogen la un șoarece C3H, au fost preparate în DMEM conținând 10% ser fetal de vițel inactivat termic (FCS), 100 U/ml penicilină, 100 μg/ ml streptomicină și   10 mM HEPES. Celulele au fost menținute în balon de țesut de 75 cm2 la 37 ° C într- o atmosferă umedă de 5% C02. Cel ulele melanom B16Kb de 1x10 6   și celulele MBT -2 au fost inoculate subcutanat în flancurile laterale rasnite ale șoarecilor. Șoarecii au primi t o suspensie de 100ul XG (10mg / ml) sau PBS intragastric o dată la fiecare 5 zile, de la 1 zi înainte de inocularea tumorii. Mărimea tumorilor primare a fost determinată la fiecare 2 sau 3 zile utilizând etriere. Volumul tumoral a fost calculat folosind formula V = (A x B pătrat) / 2  Unde V este volumul mm3 A este diametrul lung B este diametrul scurt mm F.   Analiza cutometriei fluxului  4 Celulele splenice au fost preparate în ziua 22 după inocularea subcutanată cu celule de melanom B16Kb. Celulele splenice au fost colorate cu diferite combinații de mAb și analizate utilizând un citometru de flux FACS Calibur. Limfocitele vii au fost îngrădite cu atenție prin împrăștiere în față și laterală. Proba a fost analizată cu software -ul CellQuest. G.   Măsurarea activităților NK și CTL   Activitățile NK ale splenocitelor au fost evaluate printr  -un test standard de eliberare Cr de 4 ore utilizând linia celulară YAC - 1 sensibilă la NK. Celulele tumorale au fost marcate cu 50 μ l  Na2Cr04 timp de 1 oră în mediu RPMI - 1640 conținând 1 0% FCS. Splenocitele eficace au fost luate de la șoareci inoculați anterior cu melanom B16Kb cu 20 de zile. Splenocitele au fost incubate la raportul E: T indicat cu celule țintă marca te cu 1 x 10 4   Cr în plăci cu fund rotund cu 96 de godeuri. Eliberarea sp ontană a fost, de obicei, <10% din rata totală. Activitatea CTL a fost calculată după cum urmează: (eliberare experimentală - eliberare spontană) / (eliberare totală - eliberare spontană) x 100. Pentru măsurarea activității CTL specifi ce tumorii s-au cultivat 5 x 10 6 / ml splenocite cu 5 x 10 5   celule / Ml celule de melanom B16Kb tratate cu MMC în prezența a 25 ng / ml IL- 2 în 2 ml de mediu de cultură completă timp de 5 zile. În ziua 3, jumătate din mediu se modifică cu un mediu complet conținând 25ng/ ml IL- 2. Viabilitatea limfocitelor a fost separată  prin centrifugare cu gradient de denitriție Percoll și celulele efectoare au fost incubate la raportul E: T indicat cu celule de melanom B16Kb marcate cu 1 x 10 4  Cr timp de 4 ore. H.   Analiza statistică   Semnifica ția statistică a ratei de supraviețuire a fost determinată de testul generalizat Wilcoxon. Semnificația celorlalte date a fost determinată de testul t al elevului. P <0,05 a fost luată ca nivel de semnificație. Analiza a fost efectuată utilizând software -ul Stat-View 5.0. II.3. Rezultate A.   XG macrofage stimulate pentru a produce TNF- α   și Il -12p40 Liniile de celule macrofage de șoarece, J774.1 și RAW264.7 au fost cultivate în prezența XG timp de 24 ore, iar nivelele de producție IL - 12p40 și TNF- α   au fost măsurate (figura 1b, c). Am găsit incubarea cu XG induși puternic IL - 12p40 și producerea de TNF- α  din ambele linii celulare de macrofage de șoarece. Deoarece X, campestris  sunt bacterii Gram- negative care conțin LPS, am examinat efectul adiției polimixinei B, care neutralizează activitățile LPS, asupra  producției de TNF- α    prin macrofage. Polimixina B inhibată de producerea de TNF- α   indusă de LPS indusă de LPS, dar nu XG (datele nu sunt prezentate). Astfel, activitatea biologică observată a XG asupra liniilor celulare macrofage nu a fost atribuită contaminării LPS în preparatul XG.   B.   R  ecunoașterea XG depinde în mare măsură de TLR4  

RMP_FMP_N

Dec 7, 2017
We Need Your Support
Thank you for visiting our website and your interest in our free products and services. We are nonprofit website to share and download documents. To the running of this website, we need your help to support us.

Thanks to everyone for your continued support.

No, Thanks