Philosophy

KROMATOGRAFI KOLOM II.2.1 Pengertian Kromatografi Kolom

Description
KROMATOGRAFI KOLOM II.2.1 Pengertian Kromatografi Kolom
Categories
Published
of 4
All materials on our website are shared by users. If you have any questions about copyright issues, please report us to resolve them. We are always happy to assist you.
Share
Transcript
  KROMATOGRAFI KOLOM II.2.1 Pengertian Kromatografi Kolom Kromatografi kolom memiliki prinsip yang sama dengan kromatografi lapis tipis, yakni komponenakan dipisahkan antara dua fase yaitu fase diam dan fase gerak. Fase diam akan menahan komponen campuransedangkan fase gerak akan melarutkan zat komponen campuran. Komponen yang mudah tertahan pada fasediam akan tertinggal. Sedangkan komponen yang mudah larut dalam fase gerak akan bergerak lebih cepat.Kromatografi kolom umumnya digunakan dalam proses pemurnian, pemisahan campuran, dan isolasisenyaa, baik dalam skala kecil maupun besar. Kromatografi kolom digolongkan ke dalam kromatografi cair !  padat "K#P$ kolom terbuka.Perangkat dalam kromatografi kolom terdiri dari tabung kromatografi, batang pemampat, cakram kaca berpori, tabung pengalir, dan kran.1.%abung kromatografi%erbuat dari kaca "kecuali dinyatakan lain$, berbentuk silinder dengan diameter 1&'(&mm dan pan)ang1*&'+&&mm.2. Sebuah batang pemampatatang silinder, melekat kuat pada sebuah tangkai kromatografi. -iameter lebih kurang 1 mm diameter dalam kolom. atang ini diperlukan untuk memadatkan ol kaca atau kapas pada dasar tabung )ikadiperlukan, serta untuk memadatkan zat penyerap atau campuran zat penyerap dan air secara merata di dalamtabung.(.#akram kaca berpori/elekat pada dasar tabung dan berfungsi untuk menyangga isinya.+.Sebuah tabung pengalir dengan diameter yang lebih kecilerfungsi untuk mengeluarkan cairan yang menyatu dengan tabung atau disambung melalui suatusambungan anti bocor pada u)ung baah tabung utama. %abung pengalir umumnya berdiameter dalam antara (mm hingga 0 mm.*.Kranerfungsi untuk mengatur la)u aliran pelarut yang melalui kolom dengan teliti.Pada kromatografi kolom, di dalam kolom terdapat fase diam dan fase gerak. Fase diam berupaadsorben yang tidak boleh larut dalam fase gerak. #ontoh  alumina, silica gel, arang, bauksit, magnesiumkarbonat, talk, selulosa, tanah diatom dan pati. Fase gerak yang digunakan dapat berupa pelarut tunggal ataucampuran beberapa pelarut dengan komposisi tertentu. Pelarut yang digunakan dapat bersifat polar maupunnonpolar. #ontoh fase cair  beragam senyaa kimia, seperti polyetilen glikol, ester, dan amida berbobotmolekul tinggi, hidrokarbon, gom, dan cairan silicon.II.2.2 Penggunaan Kromatografi Kolom a. -alam penentuan, baik kualitatif maupun kuantitatif, senyaa dalam protein. b.Pemisahan molekul'molekul penting seperti asam nukleat, karbohidrat, lemak, itamin dan molekul  penting lainnya. 1  c./engontrol kondisi obat tersebut sehingga bisa bertahan lama.d.-alam bidang clinical "klinik$, menginestigasi fluida badan seperti air liur. -ari air liur seorang pasien,dokter dapat mengetahui )enis penyakit yang sedang diderita pasien tersebut.e.-eteksi senyaa oksalat dalam air kencing bagi pasien kidney stones "batu gin)al$.II.2.( 3enis')enis Kromatografi Kolom Kromatograf kolom dapat digolongkan berdasarkan mekanisme pemisahan yang digunakan, yakni : • Kromatograf kolom adsorbsiDigunakan untuk pemisahan golongan senyawa berdasarkan gugus ungsional yang terdapat dalam senyawa tersebut. Fase gerak biasanya bersiat nonpolar terhadap ase diam. Pelarut yang digunakan metanol, kloroorm, dietil eter, isopropanol. • Kromatograf kolom partisiFase diam: silika/alumina yang permukaannya dilapisi lapisan air. Fase diamterikat pada partikel padat. Kromatograf kolom partisi terbagi dua berasarkan aseterikat, yaitu ase normal dan ase terbalik. Perbedaan kedua ase tersebut dapat diliahat dari tabel di bawah ini. Tabel Perbedaan Fase Normal dan Fase Gerak pada Kromatograf KolomPartisi Jenis/SiatFase NormalFase Terbalik Fase diam (kolom) Polar!on polar  Jenis Kolom "ilika, alumina#$1%, #$%, #$!, #Fenil Fase gerak(eluen) !on polarPolar  Jenis elusi &eksana, kloroorm'e(&,&)(, $&*$!, +&F Urutan elusi !on polar di awalPolar dibelakangPolar di awal!on polar di belakang II.2.+ Prosedur Kromatografi Kolom/etode Pemasukan 4at ke dalam Kolom5da 2 metode yang dapat diterapkan dalam memasukkan zat, yaitua./etode basah1$4at dilarutkan dalam pelarut yang sesuai dan dimasukkan ke kolom.2$Kran yang berada di bagian baah dibuka sehingga larutan tersebut dapat mengalir ke baah hingga  batas permukaan fase diam.($Kran ditutup dan dituangkan fase gerak.+$Kran kembali dibuka dan larutan "zat dan fase gerak$ akan mengalir ke baah mengikuti gaya graitasi. )  #atatanFase gerak harus tetap dialirkan untuk men)aga agar penyangga tidak mengering.  b./etode keringKepolaran pelarut 6 eluent, maka zat dapat tidak terikat secara sempurna dengan fase diam.1$4at u)i dilarutkan dalam sedikit pelarut.2$Kemudian di dalamnya ditambahkan 71&& mg penyangga "contoh, gel silika$.($#ampuran diaduk hingga pelarutnya dan meninggalkan campuran kering zat dan penyangga.+$#ampuran kering dimasukkan ke dalam kolom, ditambahkan fase gerak dan kran dibuka.*$8arutan akan mengalir ke baah dan proses elusi dapat ber)alan.#atatan Sama seperti metode basah, fase gerak harus tetap dialirkan untuk men)aga agar penyangga tidak mengering.'Proses 9lusiProses elusi adalah prosedur pemisahan zat terlarut oleh suatu proses migrasi differensial dinamis dalam sistemyang terdiri dari dua fase atau lebih.8a)u gerakan zat dipengaruhi oleh se)umlah ariabel, misalnya'-aya adsorpsi fase diam':kuran partikel dan luas permukaan'Sifat dan polaritas pelarut, tekanan yang digunakan dan suhu sistem kromatografi.'3ika senyaa yang terpisah itu berarna atau berfluoresensi di baah cahaya ultraiolet, kolom pen)erap dapat dikeluarkan, dengan cara memotong melintang, lapisan yang diperlukan dapat dipisahkan.;ambaran proses elusi kromatografi kolom dapat dilihat pada gambar berikut Gambar 2. Proses Elusi Sampel yang akan dipisahkan dielusikan dalam kolom . #ontoh pada gambar pemisahan zat berarnamerah dan dan zat berarna hi)au. <al ini dapat ter)adi karena zat berarna hi)au memiliki sifat lebih polar dibandingkan zat berarna merah sehingga dapat membentuk ikatan dengan fase diam "teradsorpsi di permukaan penyangga$. <al ini mengakibatkan zat berarna hi)au lebih lama tertahan dalam fase diam dantidak terbaa oleh fase gerak. Selain itu, zat berarna merah memiliki kepolaran yang lebih rendah sehinggatidak tertahan pada fase diam dan ikut terbaa aliran fase gerak. 5kibatnya, zat berarna merah meninggalkan *  kolom kromatografi lebih cepat dibandingkan tinta biru. 5danya perbedaan kepolaran ini menyebabkan zatcampuran terelusi men)adi zat berarna merah dan hi)au.Proses elusi ber)alan akibat adanya tekanan yang diberikan ke dalam kromatografi. %ekanan dapat berasal dari tekanan atmosfer ataupun pemberian tekanan tambahan "dengan dipompa ataupun gasterkompresi$.5kibat dari adanya tekanan tersebut adalah fase gerak dan zat u)i dapat mengalir turun di dalamkromatografi.3ika proses aliran ber)alan lambat, tekanan dapat ditambahkan salah satunya dengan memasangkaret pipet di atas kolom kromatografi. Kromatogram adalah hasil pemisahan zat oleh proses elusi.Kromatogram dapat dibedakan sebagai berikut1.erupa lapisan=pita'pita zat terpisah dalam kolom3ika senyaa yang terpisah itu berarna atau berfluoresensi di baah cahaya ultraiolet. 8apisan yangdiperlukan dapat dipidahkan. Senyaa yang dikehendaki kemudian diekstraksi dari tiap lapisan dengan pelarutyang sesuai.2.erupa eluat9luat merupakan larutan yang keluar dari kolom dan merupakan hasil elusi. Fraksi'fraksi elusinyaditampung secara terpisah dan dapat diidentifikasikan secara tersendiri. Kadar eluat dapat ditentukan dengancara titrasi, spektrofotometri atau kalorimetri, atau pelarutnya dapat diuapkan sehingga diperoleh zat dalamkadar murni.>olume retensi ">/$  olume eluen ">?$ yang diperlukan untuk membaa zat tersebut keluar dari kolom.Sementara itu, t? aktu yang diperlukan zat tersebut untuk melintasi kolom"t/ $>? @ >/ "1AKB$t? @ t/ "1AkB$ kB @ factor kapasitas 
We Need Your Support
Thank you for visiting our website and your interest in our free products and services. We are nonprofit website to share and download documents. To the running of this website, we need your help to support us.

Thanks to everyone for your continued support.

No, Thanks
SAVE OUR EARTH

We need your sign to support Project to invent "SMART AND CONTROLLABLE REFLECTIVE BALLOONS" to cover the Sun and Save Our Earth.

More details...

Sign Now!

We are very appreciated for your Prompt Action!

x